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CSF蛋白电泳操作流程(SOP)

时间:2017-10-06    点击: 次    来源:本站    作者:佚名 - 小 + 大

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一、准备

1、  标本

   CSFIg-G浓度>2mg/dl

     用标本稀释剂将CSF与血清都稀释到2mg/dl

  1mg/dl<CSFIg-G浓度<2mg/dl

     用稀释剂稀释血清,使它的Ig-G浓度与CSF一样

   CSFIg-G浓度<1mg/dl

     浓缩CSF,使它的Ig-G浓度在12mg/dl之间

     稀释血清,使它的Ig-G浓度跟CSF的一样

2、  TTF3显影剂

4ml TTF3 溶剂+100μl TTF3+4μl H2O230%

3、  Ig-G

3’:18μl Ig-G+130μl 抗血清稀释剂(antiserum dilvent

6’:30μl Ig-G+220μl 抗血清稀释剂(antiserum dilvent

二、 步骤

A、电泳

1、  加样

3’:各孔加16μl 的标本,依次为两孔一组,血清在前

6’:各孔加15μl 的标本。

在两分钟内完成加样,并将加样疏在干燥盒中干燥20分钟

2、  缓冲条准备

在标本干燥完成前5分钟准备缓冲条

在容器中倒入溶解剂,灰色容器倒入阳极溶解剂,蓝色容器倒入阴极溶解剂,将缓冲条放在容器中浸透,可用移液管的尖头部位按压缓冲条使之渗透溶解剂,放置5分钟。

3、  挂缓冲条

将阴极缓冲条挂在上面的电极(无色),将阳极缓冲条挂在下面的电极上(红色)

4、  滴乙烯乙二醇(EG

3’:在电泳平台的三分之一处滴入EG 150μl

6’:EG 300μl

5、  放胶片(同做血清蛋白电泳)

6、  放塑料板,沿着胶片黑快的上边缘盖在胶片上

7、  放下电极架,在8号位放上加样疏

B、加抗体

1、  电泳结束,加抗体时3’和6’的需要加一个小架子

2、  加抗体   3’:在4 -12孔加抗体15μl

               6’:各孔也加15μl

3、  移去电极架以及塑料板,放固定杆,放上抗体架,同做免疫固定,来回推动抗体架2 次,每次5秒,“START

C、水合显影

1、  抗体结束,放上厚滤纸,“START”

2、  听到一声响后,拿掉滤纸,放上水合模板,3’:R39’:ENZ 4ml

3、  加水合剂,3’:4.5ml9’:7ml

4、 START

5、  结束后,用移液管吸取多余的水合剂

6、  移去水合模板,放厚滤纸,“START

7、  结束后,拿掉滤纸,再放上水合模板,放水合剂,“START ,同上

8、  结束后,再吸掉多余的水合剂

9、  加显影液,3’:3ml6’:3.5ml,“START

10、结束后,吸取多余的显影液,移去水合模板(将模板擦干净),放上厚滤     纸,“START”

11、结束后,拿掉滤纸,“START

12、结束

D、清洗

   若在做CSF之前刚清洗过蛋白胶片,则先清洗缸。

   选择“WASH ISOENZYME”,清洗胶片。

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